hat培养基

更新时间:2023-07-03 21:45

1964年Littlefield首先发明了HAT(H—Hypoxanthine次黄嘌呤,A—Aminopterin氨基蝶呤,T——Thymidine 胸腺嘧啶核苷)培养基的选择培养

释义

缺失这两种酶之一的细胞,在HAT培养基中,应该不能生存,只有发生融合或者其他情况下,才能使细胞重新获得用旁路途径进行DNA合成能力。

HAT培养基也就是指含有这三种物质的细胞培养基。对£具有合成DNA原料的核苷酸的形成上,在细胞内具有起始合成途径(denovopathway)和中间合成途径(salvagepathway)。中间合成途径包括:通过HGPRT催化作用把次黄嘌呤转化成次黄嘌呤核苷-磷酸(IMP),通过TK的催化把胸腺嘧啶核苷转化成脱氧胸腺嘧啶核苷-磷酸(dTMP),再进一步合成核酸。由于氨基蝶呤可阻碍起始合成途径,所以培养基中含有它时,细胞便只有中间合成途径,所以必须供给核苷酸。至于缺失中间合成途径的细胞,可失去增殖能力臻于死亡。根据这一点,不仅把混存于细胞群中的正常细胞,通过试管内培养进行选择,例如嘌呤的中间合成途径缺失株和嘧啶的中间合成途径缺失株,由于可以互补,所以两者的杂种细胞,即使在氨基蝶呤的存在条件下也可以增殖。在这种情况下,利用HAT培养基可对杂种细胞进行选择。次黄嘌呤胸腺嘧啶脱氧核苷可作为中间合成途径的原料而进行添加。

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