下列术语和定义适用于GB/T 5535的本部分。

不皂化物

用氢氧化钾皂化后的全部生成物用指定溶剂提取，在规定的范围条件下不挥发的所有物质。

原理

油脂与氢氧化钾乙醇溶液在煮沸回流条件下进行皂化，用乙醚从皂化液中提取不皂化物，蒸发溶剂并对残留物干燥后称量。

试剂

本部分使用的试剂均为分析纯，水为蒸馏水、去离子水或等同纯度的水。

乙醚：新蒸过，不含过氧化物或残留物。

丙酮。

氢氧化钾—乙醇溶液：c（KOH）约为1 mol/L。

酚酞指示剂溶液：10g/L的95%（体积分数）乙醇溶液。

仪器

圆底烧瓶：带标准磨口的250mL圆底烧瓶。

回流冷凝管：具有与圆底烧瓶配套的磨口。

500mL分液漏斗：使用聚四氟乙烯旋塞和瓶塞。

水浴锅。

电烘箱：可控制在103℃±2℃。

扦样

扦样不是本部分规定的内容，推荐采用ISO 5555的方法。

实验室收到的样品应具有代表性，在运输和存储过程中不应受损或改变。

试样制备

按GB/T 15687执行。

操作步骤

试样

称取约5g试样，精确至0.01 g，置于250 mL烧瓶中。

皂化

加入50 mL氢氧化钾一乙醇溶液和一些沸石。烧瓶与回流冷凝管(6.2)连接好后，小心煮沸回流1h。停止加热，从回流管顶部加入100 mL水并旋转摇动。

如果提取的不皂化物用于测定生育酚，则必须添加联苯三酚且尽快地完成操作(30 min以内)。

不皂化物的提取

冷却后转移皂化液到500 mL分液漏斗，用100 mL乙醚分几次洗涤烧瓶和沸石，并将洗液倒入分液漏斗。盖好塞子，倒转分液漏斗，用力摇1 min，小心打开旋塞，间歇地释放内部压力。静置分层后，将下层皂化液尽量完全放入第二只分液漏斗中。如果形成乳化液，可加少量乙醇或浓氢氧化钾或氯化钠溶液进行破乳。采用相同的方法，每次用100 mL乙醚再提取皂化液两次，收集三次乙醚提取液放入装有40 mL水的分液漏斗中。

乙醚提取液的洗涤

轻轻转动装有提取液和40 mL水的分液漏斗。

警告：剧烈的摇动可能会形成乳化液。

等待完全分层后弃去下面水层。用40 mL水再洗涤乙醚溶液两次，每次都要剧烈震摇，且在分层后弃去下面水层。排出洗涤液时需留2 mL，然后沿轴线旋转分液漏斗，等待几分钟让保留的水层分离。弃去水层，当乙醚溶液到达旋塞口时关闭旋塞。

用40 mL氢氧化钾水溶液，40 mL水相继洗涤乙醚溶液后，再用40 mL氢氧化钾水溶液进行洗涤，然后用40 mL水洗涤至少两次以上。

继续用水洗涤，直到加入1滴酚酞溶液至洗涤液后，不再呈粉红色为止。

蒸发溶剂

通过分液漏斗的上口，小心地将乙醚溶液全部转移至250 mL烧瓶中。此烧瓶需预先于103℃±2℃的烘箱中干燥，冷却后称量，精确至0.1 mg。在沸水浴上蒸馏回收溶剂。

加入5 mL丙酮，在沸水浴上转动时倾斜握住烧瓶，在缓缓的空气流下，将挥发性溶剂完全蒸发。

残留物的干燥和测定

将烧瓶水平放置在103℃±2℃的烘箱中，干燥15 min，然后放在干燥器中冷却，取出称量，准确至0.1 mg。

按上述方法间隔15 min重复干燥，直至两次称量质量相差不超过1.5mg如果三次干燥后还不恒质，则不皂化物可能被污染，需重新进行测定。

注：如果条件允许，尤其是如果不皂化物需要进一步检测时，可使用真空旋转蒸发器。

当需要对残留物中的游离脂肪酸进行校正时，将称量后的残留物溶于4 mL乙醚中，然后加入20 mL预先中和到使酚酞指示液呈淡粉色的乙醇。用0.1 mol/L标准氢氧化钾醇溶液滴定到相同的终点颜色。

以油酸来计算游离脂肪酸的质量，并以此校正残留物的质量。

测定次数

同一试样需进行两次测定。

空白试验

用相同步骤及相同量的所有试剂，但不加试样进行空白试验。如果残留物超过1.5 mg,需对试剂和方法进行检查。

结果计算

试样中的不皂化物含量按公式计算:

X=（m1-m2-m3）/m0 x 100 式中:

X—试样中不皂化物的含量，以质量分数计，%;

m0—试样的质量，单位为克(g) ；

m1—残留物的质量，单位为克(g)；

m2—空白试验的残留物质量，单位为克(g) ；

m3—游离脂肪酸的质量，如果需要，等于0.28 V X c，单位为克(g)；

其中:

V—滴定所用标准氢氧化钾乙醇溶液的体积，单位为毫升(mL) ；

c—氢氧化钾乙醇标准溶液的准确浓度，单位为摩尔每升(mol/L) 。

用两次测定数据的算术平均值作为结果。

范围

GB/T 5535的本部分规定了己烷三次提取测定动植物油脂不皂化物含量的方法。本部分适用所有油脂，不适用于蜡。

警告：与GB/T 5535.1中的方法相比，本方法的测定结果较低。

规范性引用文件

下列文件中的条款通过GB/T 5535本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。GB/T 15687油脂试样制备(GB/T 15687-1995 , eqv ISO 661:1989)

术语和定义

下列术语和定义适用于GB/T 5535的本部分。

不皂化物 unsaponifiable matter

用氢氧化钾皂化后的生成物用己烷提取，在规定条件下不挥发的所有物质。

注：不皂化物包括自然界中脂类物质，如街醉、烃类、醇类、脂肪族和菇烯醇类，以及用溶剂在103℃提取时不挥发的(如矿物油)外来有机物。

原理

油脂与氢氧化钾乙醇溶液在煮沸回流条件下进行皂化，用己烷或石油醚从皂化液中提取不皂化物，蒸发溶剂并对残留物干燥后称重。

试剂

本部分使用的试剂均为分析纯，水为蒸馏水、去离子水或同等纯度的水。

正己烷或沸程为40 0C ^-60℃的石油醚:溴价低于1，且不得含有杂质。

10%(体积分数)乙醇水溶液。

酚酞指示剂：10 g/L的95%(体积分数)乙醇溶液。

氢氧化钾一乙醇溶液：c<（KOH）≈1 mol/L。在50 mL水中溶解60 g氢氧化钾，然后用95%乙醇稀释至1000 mL，溶液应为无色或浅黄色。

仪器

实验室常用仪器，特别是下列仪器：

圆底烧瓶：带标准磨口的250 mL圆底烧瓶。

回流冷凝管：具有与烧瓶配套的磨口。

250 mL分液漏斗：使用聚四氟乙烯旋塞和瓶塞。

水浴锅。

电烘箱：可保持103℃±2℃。或者真空干燥器，如旋转蒸发器及其他相似设备。

扦样

扦样不是本部分规定的内容，推荐采用ISO 55550实验室收到的样品应具有代表性，在运输和存储过程中不应受损或改变。

试样制备

按GB/T 15687执行。

分析步骤

称样

称取约5g试样，精确至0.01 g，放入250 mL烧瓶中。

皂化

加50 mL氢氧化钾溶液和一些沸石。烧瓶与回流冷凝管联接好后煮沸回流1h。停止加热，从回流管顶部加入50 mL水并旋转摇动。

不皂化物的提取

冷却后转移皂化液到250 mL分液漏斗，用50 mL己烷分几次洗涤烧瓶和沸石，洗涤液倒入分液漏斗。盖好旋塞，用力摇1 min，倒转分液漏斗，并小心打开旋塞，间歇地释放内压。静置分液漏斗，至溶液分层后，尽量将下层皂化液放入第二只分液漏斗中。如果形成乳化液，须加少量乙醇或浓氢氧化钾或氯化钠破乳。

用相同方法，每次用50 mL己烷对皂化液再提取两次。三次己烷提取液收集在同一分液漏斗中。

己烷提取物的洗涤

用乙醇溶液洗涤提取液三次，每次用量25 mL，并剧烈摇动，洗涤后弃去乙醇水溶液，每次弃去洗涤液后，保持分液漏斗中剩余2 mL洗涤液，然后将分液漏斗沿其轴线旋转。静置数分钟，使剩余的乙醇水相进一步分离，然后弃去。当己烷溶液到达旋塞孔道时关闭旋塞。继续用乙醇水溶液洗涤，直到洗涤液加入1滴酚酞溶液后不呈现粉红色为止。

蒸发溶剂

通过分液漏斗的上口小心地将己烷溶液转移到准确称量至0.1 mg的250 mL烧瓶(6.1)中。烧瓶需预先在103℃烘箱中干燥冷却后称量。在沸水浴中蒸发溶剂。

残留物的干燥和测定

将烧瓶水平放置在103℃烘箱(6.5)中，干燥残留物15 min。在干燥器中冷却，并精确称量至0.1 mg。也可使用真空干燥器干燥，在最大真空度下，在沸水浴中蒸15 min之后，冷却至室温，将烧瓶表面的水擦干，精确称量至0.1 mg。

重复进行干燥，直至两次称量的质量差不超过1.5mg。如果三次干燥后还不恒质，则不皂化物可能被污染，需重新进行测定。

若需用游离脂肪酸进行校正，则将称量后的残留物溶于4 mL正己烷中，然后加入20 mL预先中和到使酚酞指示剂呈淡粉色的乙醇。用0. 1 mol/L标准氢氧化钾一乙醇标准溶液标定至终点。以油酸计算游离脂肪酸的质量，并以此校正残留物的质量。

测定次数

同一试样需进行两次测定。

空白实验

需进行一个空白实验，用相同步骤及相同量的所有试剂，但不加试样。如果残留物超过1.5 mg，需检查测定方法和试剂。

结果计算

试样不皂化物含量按公式计算：

X=（m1-m2-m3）/m0 x 100 式中：

x—试样中不皂化物的含量，以质量分数计，%;

m0—试样的质量，单位为克(g) ;

m1—残留物的质量，单位为克(g);

m2—空白的残留物质量，单位为克(g);

m3—游离脂肪酸的质量，等于0.28x V x c，单位为克(g);5其中:

V—滴定所用标准氢氧化钾一乙醇溶液的体积，单位为毫升(mL) ;

c氢氧化钾一乙醇标准溶液的准确浓度，单位为摩尔每升(mol/L)。

用两次测定数据的算术平均值作为测定结果。