伊莎贝尔生于洛林，父亲是洛林公爵夏尔二世·德·洛林，母亲是罗马人民的国王鲁普雷希特的长女玛格丽特。作为家中的长女，1410年伊莎贝尔十岁时，由于她的弟弟们先后去世，她被确立为洛林公爵的继承人。她接受了完整且正规的教育，自少女期就被公认为美丽、机智、勇敢，而且能在困难的局势中保持镇定并理智地做出决断。1420年10月24日，20岁的伊莎贝尔与11岁的安茹的勒内结婚。婚姻契约规定：当洛林公爵夏尔二世过世后，伊莎贝尔将继承洛林，勒内将继承巴尔，而夫妻未来的子女兼继承人将会继承他们所有领土，从而使安茹家族和洛林家族合并在一起。

当其父于1431年1月25日去世后，伊莎贝尔继承了洛林公国，并按照习惯法让丈夫成为共同统治者（共享洛林公爵的头衔）。但是她的堂兄沃代蒙伯爵安托万·德·沃代蒙挑战她的继承权，认为自己才是洛林公爵的唯一继承人。安托万联合强大的勃艮第公爵腓力三世出兵攻击勒内，在同年7月的布尔格涅维尔战役中大胜并俘虏了勒内。虽然勇敢的伊莎贝尔成功保住洛林的过半领土，又与堂哥安托万缔结休战合约，但丈夫勒内仍被引渡给勃艮第公爵腓力三世。直到1432年4月，勒内宣誓效忠腓力并以两个儿子让和路易做人质后，才获得假释与短暂自由。1433年，伊莎贝拉和丈夫把长女约兰德嫁给安托万的儿子费里二世·德·沃代蒙，因此当后来勒内的男系子孙绝嗣时，洛林公国意外地在1473年传给了费里与约兰德的儿子勒内二世。