更新时间：2024-07-28 15:45
共焦显微术的概念最早由M. Minsky在20世纪50年代提出。M. Minsky在哈佛大学做研究期间，于1957年对载物台扫描共焦光学显微镜申报了美国国家专利。在此成像系统中,采用点光源照明样品，而携带样品信息的光被点探测器收集，最后利用横向和轴向扫描技术获得整个样品的三维信息。
共聚焦激光扫描显微镜（Confocal Laser Scanning Microscope，CLSM）是近十多年研制成的高光敏度、高分辨率的新型仪器。它以激光为光源，由共聚焦成像扫描系统、电子光学系统和微机图像分析系统组成。光束经聚焦后落在样品(组织厚片或细胞)不同深度的微小一点，并作移动扫描，通过电信号彩色显像，可使样品内任何一点的反射光形成的图像，都被准确地接收下来并产生信号，传递到彩色显示器上，再连接微机图像分析系统进行分析处理。
共聚焦显微镜的工作原理。
共聚焦系统的光源为离子激光器或HeNe激光器，光源发出的激光束通过照明针孔后成为点光源P。点光源P通过分束器进入高数值孔径显微物镜的成像系统成像后，在部分透明的被测样品内形成像点P。从像点P发出的散射光及反射光(波长为λ1)和其他荧光(波长λf>λ1),反方向经过物镜和分光镜后，入射到单点探测器。单点探测器由探测器和放置在探测器前的针孔组成，它可以减少探测器的有效面积。探测器一般使用的是光电倍增管或雪崩光电二极管，探测器接收到的电信号最后由计算机进行处理。
①如果激光束聚焦点的直径小于针孔的直径,则P处的针孔可以去掉。
②有些材料能自发荧光,有些材料则需要用合适的染料上色。
根据共聚焦点相对于标本的移动方式,目前共聚焦显微镜可分为3种。
其中最简单的是在透镜系统的光轴上固定住一个射限制点，控制其不发生术射，同时移动标本(标本扫描)( Brakenhoff, et al.,1989)；
另一类是多点扫描型，弧形灯发出的光东经一个转动孔板精细定位，平行地进行扫描和检测( Egger and Petran,1967; Xiao and Kino,1987)，也就是转盘共聚焦显微镜(spinning-disk confocal microscope)；
最为常见的类型是单点扫描，即通过移动反射镜或使用声光偏转仪使激光通过光栅进行偏转( Carlsen, etal, 1985)。
全内反射荧光显微镜（TIRFM）
共聚焦激光扫描显微技术{ confocal laser scanning microscopy)
一般荧光显微镜对于薄样品可获得清晰的图像，但当样品较厚时，物平面之外的荧光分子也会被激发，而这些光在像平面上是弥散的，因而干扰成像质量。20世纪50年代, Minsky发明了共聚焦显微成像方法，但直到20世纪70年代，激光光源和计算机技术的发展才使共聚焦技术真正得以实现。共聚焦的含义就是将聚焦平面以外的成像信息过滤，使其不在最终的成像结果中显示，首先将光线聚焦于一点或一线，然后对所要观察的平面进行扫描，焦平面以外的光线通过检测针孔隔离。