指反应过程中反应速度维持不变，与底物浓度无关，因此，在整个反应过程中，反应物可以匀速地生成某个产物，导致被测定溶液在某一波长下吸光度均匀地减小或增加，减小或增加的速度(△A/min)与被测物的活性或浓度成正比，主要用于酶活性的测定。

实际上，由于底物浓度不可能足够大，随着反应的进行，底物消耗到一定程度后，反应速度不再维持不变，同样，由于血清成份复杂，反应刚启动时反应较复杂，杂反应较多，因此，零级动力学法是针对于特定时间段而言的，各试剂商对这段时间有严格规定