1983年9月29日，开通326路（第1代），首末站为苹果园地铁站至门头沟路，长度12.05公里。

后历经数次调整，首末站改为苹果园地铁站（六区地铁）至门头沟圈门。

2004年5月26日，因326路（第1代）与北京公交370路合并，撤销326路（第1代）。

北京公交326路（第2代）运营于北京市昌平区。

2007年8月26日，开通326路（第2代），首末站为朝凤庵村至超前路，长度6.95公里。中途设站：朝凤庵村-前锋学校-昌平东关-亢山广场-松园小区西门-中国政法大学北门-昌平一中-新新公寓东门-昌平中医医院-润杰经典小区-水关路口东（上行）-富康路（上行）-超前路。

2009年4月26日，2009年第一批公交线网优化方案正式实施。为完善区内交通、增加线网覆盖，调整326（第2代），改走鼓楼南街。撤销新新公寓东门、昌平中医医院，增设东环北路北口、昌平北站、昌平区医院、鼓楼南街北口、昌平公园、昌平南环路。

2010年12月30日，配合北京地铁昌平线一期工程（南邵-西二旗）开通，为方便昌平城区乘客换乘地铁昌平线，调整326路（第2代），接驳地铁昌平线。撤销富康路（单向）、超前路，增设水关路口东（单向）、振兴路、世涛天朗小区南门、昌盛园二区东门、南环大桥西、南环大桥东、张营村、地铁南邵站。