更新时间:2023-06-26 21:55
所谓同聚物加尾法就是利用末端转移酶在载体及外源双链DNA的3’端各加上一段寡聚核苷酸,制成人工黏性末端,外源DNA和载体DNA分子要分别加上不同的寡聚核苷酸,如dA(dG)和dT(dC),然后在DNA连接酶的作用下连接成为重组的DNA。
这种方法的核心是利用末端转移酶的功能,将核苷酸转移到双链DNA分子的突出或隐蔽的3'-OH上。以Mg作为辅助因子,该酶可以在突出的3'-OH端逐个添加单核苷酸,如果用Co作辅助因子则可在隐蔽的或平末端的3'-OH端逐个添加单个核苷酸。
同聚物加尾法优点: 1)首先不易自身环化. 2)因为载体和外源片段的末端是互补的黏性末端,所以连接效率较高.3)用任何一种方法制备的DNA都可以用这种方法进行连接.缺点:(1)方法繁琐;(2)外源片段难以回收。由于添加了许多同聚物的尾巴,可能会影响外源基因的表达.重组连接后往往会产生某种限制性内切核酸酶的切点.
用5’ 末端处理DNA片断