更新时间:2024-06-16 18:01
利用这一技术可以得到完全人源性的抗体,在HIV等病毒感染和肿瘤的诊断与治疗方面有其独特的优越性。
噬菌体抗体库技术的原理,简言之就是用PCR技术从人免疫细胞中扩增出整套的抗体重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因,克隆到噬菌体载体上并以融合蛋白的形式表达在其外壳表面。这样一来噬菌体DNA中有抗体基因的存在,同时在其表面又有抗体分子的表达,就可以方便地利用抗原—抗体特异性结合而筛选出所需要的抗体,并进行克隆扩增。使抗体基因以分泌的方式表达,则可获得可溶性的抗体片段。在建库过程中如果将VH和VI。随机组合,则可建成组合抗体文库;如果抗体mRNA来源于未经免疫的正常人,则可以在不需要细胞融合的情况下建立起人天然抗体库。
②应用抗体轻链和重链引物,根据建库的需要通过PCR技术扩增不同的Ig基因片段;
③构建噬菌体载体。噬菌体抗体库载体有入噬菌体、丝状噬菌体和噬菌粒三种,其中后二者是构建表面表达的噬菌体抗体库(surfacedisplayantibody library)常用载体;
④表达载体转化细菌,构建全套抗体库。通过多轮的抗原亲和吸附—洗脱—扩增,最终筛选出抗原特异的抗体克隆。
1.模拟天然全套抗体库 抗体文库可以达到或超过1011库容,所以能包含B细胞全部克隆。建库的外源基因来自人体外周血,骨髓或脾脏的淋巴细胞提取的mmDNA,mmDNA反转录形成cDNA,这些mRNA是人体多克隆细胞的总mRNA。使用的通用引物采自多个人体,具有人的种属普遍性。抗体的VH和VL基因的随机重组也增加了抗体的多样性。
2.避免使用人工免疫和杂交瘤技术 由于抗体库的大容量和极高的筛选效率,使得可以调出任意抗体基因,用基因工程方法制备抗体,从而避免了使用人工免疫动物和细胞融合技术。
3.可获得高亲和力的人源化抗体 在噬菌体抗体库技术中,VH和VL基因的随机重组模拟了体内抗体亲和力成熟的过程,所用的抗体基因又来自人体,因此,所产生的抗体必然都是高亲和力的人源化抗体。