更新时间:2023-05-18 19:58
四甲基联苯胺,别名3,3',5,5'-四甲基联苯胺,是一种化学物质,化学式是C16H20N2。
3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(3,3’,5,5’-Tetramethylbenzidine)即TMB是一种脂溶性较强的基团,因此容易进入细胞与细胞器中的HRP反应,且由于这种高度的脂溶性,使其易形成多聚体,在HRP活性部位产生粗大的、深蓝色沉淀物,这使得TMB成为组化实验中的一种很好的发色团。同时反应产物的沉淀,使得HRP的活性部位更加暴露,利于酶氧化反应进行。
TMB的反应产物为深蓝色,利于光镜观察,且反应产物越聚越大,常超出单个细胞器的范围(而DAB则被限制在其内),故TMB反应的检测阈较低。
由于上述优点,目前TMB常用于光镜及超微结构水平的HRP及HRP-WGA神经投射的研究。需要注意的是:TMB显色液中的A液和B液应在2h内新鲜配制。另外,TMB是一种较强的皮肤刺激剂,并有致癌的潜在可能,故使用时应带手套及在通风条件下操作。
TMB经HRP作用后共产物显蓝色,目视对比鲜明。TMB性质较稳定,可配成溶液试
剂,只需与H2O2溶液混和即成应用液,可直接作底物使用。另外,TMB又有无致癌性等
优点,因此在ELISA中应用日趋广泛。酶反应用HCL或H2SO4终止后,TMB产物由蓝色呈
黄色,可在比色计中定量,最适吸收波长为450nm。
ABTS虽不如OPD和TMB敏感,但空白值极低,也为一些试剂盒所采用