（5）雄性酮标准液（100mg/L）：精确称取雄性酮10mg，置干燥100ml容量瓶中，用经纯化的去醛乙醇溶解并稀释至刻度。分装于洁净的中号试管中，每管0.1ml（含10μg）37℃温箱中烘干，置暗处保存，每次测定时取出一管使用。

（6）去醛乙醇液的制备：取无水乙醇1000ml，加盐酸间苯二胺4g，充分混匀后，静置暗处一周，每天振摇2次，到期进行蒸馏，并弃去开始蒸出与最后剩余部分各约50ml，收集所得的乙醇，置棕色瓶中保存。

（7）750ml/L去醛乙醇液：取无水去醛乙醇75ml，加蒸馏水至1000ml。

（8）20g/L间二硝基苯乙醇溶液：取无色的间二硝基苯0.2g。溶于去醛无水乙醇中，使总量为10ml。盛于棕色瓶内。冰箱保存备用。若间二硝基苯质量较差需做以下提纯处理：

①取间二硝基苯20g，于95%乙醇75ml中，加热至40℃左右使其溶解。

②加入2mol/L氢氧化钠溶液100ml。

③5min后，加入蒸馏水2500ml，混和。

④加滤纸在布氏漏斗中过滤，并用较多量的蒸馏水洗涤后吸干。

⑤依此法用无水乙醇120ml及180ml重结晶二次。置于干燥器内待用。

（9）乙醚（AR）。

（1）在盛尿容器内加浓盐酸5ml作防腐剂。收集24h尿液，混匀，并量取总量。

（2）取尿样5ml，放入20mm×150mm试管中，加浓盐酸15ml；在沸水浴中煮沸20min，取出，置冷水中冷却。

（3）冷却尿样移入30ml小分液漏斗，加乙醚10ml，振摇2min，放置待分层后弃去下层尿液。

（4）向小漏斗中加入1mol/L氢氧化钠5ml，轻摇1min，洗乙醚，放置澄清，弃去下层水相。

（5）再用蒸馏水2.5ml，轻摇洗乙醚1min，放置澄清，弃去下层水相。

（6）将乙醚移入15ml试管中，于40～45℃水浴中蒸干，此管即为测定管。

（7）按表1进行操作，设测定管、标准管（内含雄性酮标准0.01mg）、空白管。

将各管混匀，同时在1000r/min离心2min，取上层溶液移入10mm光径比色杯中。520nm波长，以空白调零，读取各管的吸光度。

男：8～12mg/24h尿；女：6～9mg/24h尿。

（1）库兴氏综合征、睾丸瘤（尤其是间质细胞瘤）、性早熟、多囊卵巢、肢端肥大症等疾病尿17-酮类固醇明显增高。使用雄激素、皮质激素以及ACTH等药物也可使尿17-酮类固醇增高。

（2）肾上腺皮质功能减退症、腺垂体功能减退症、睾丸功能减退症、肝硬化以及糖尿病、肺结核、高度营养不良等慢性消耗性疾病，尿17-酮类固醇都可出现降低。

（1）所用无水乙醇必须进行去醛处理，否则空白管读数太高，影响结果的准确性。

（2）水分可影响间-二硝基苯与17-酮类固醇的缩合作用，故乙醚蒸发后，管内不应残留水分。

（3）本法显色不够稳定，比色应在10min内完成，大批标本时宜分批显色。

（4）如室温过低，比色液可显混浊，应在此前加饱和盐水0.1ml，使混浊消失后再进行比色。

（5）如尿液不能及时测定，应置冰箱存放，以免17-酮类固醇破坏而使结果减低。