平末端

更新时间:2023-07-03 10:52

平末端指DNA分子两条链在限制性内切酶作用下断裂的位置是处在 一个对称结构的中心,形成的一种平齐的末端结构类型。大多数II型限制酶的识别序列都是回文结构,即以双对称轴按5'—3'方向阅读时,其碱基顺序都是相同的,所以当切割位点在对称轴上,限制片段为平末端。具 有平齐末端的DNA可以连接,但连接效率只有黏性末端连接效率的1%。(李英碧)

术语介绍

当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时,切开的DNA两条单链的切口,是平整的,这样的切口叫平末端。

限制性内切酶切断的DNA分子片段,需要一种特殊的酶——DNA连接酶来缝合,恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。E·coliDNA连接酶只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间连接起来,不能将双链DNA片段平末端之间进行连接。而T4DNA连接酶既可以“缝合”双链DNA片段互补的黏性末端,又可以“缝合”双链DNA片段的平末端,但连接平末端之间的效率比较低。

相关措施

提高平末端连接效率的措施

①提高T4DNA连接酶的浓度;②提高DNA片段的浓度;③降低ATP浓度,以增强连接物与DNA结合;④加入多胺化合物,如亚精胺,降低DNA的静电排斥力;⑤加浓缩剂,如大分子排阻物聚乙二醇PEG)、强水化物三氯化六氨钴等。

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