有限稀释法

更新时间:2023-06-13 14:59

有限稀释法是一种常用的克隆方法,是指将需要再克隆的细胞株自培养孔内吸出并作细胞计数,计出1mL的细胞数。常用来筛选融合的动物细胞

操作过程

用HT培养液稀释, 使细胞浓度为50~60个/mL,于96孔培养板中每孔加0.1mL(5.5个细胞/孔)。接种2排,剩余细胞悬液用HT培养液作倍比稀释,再接种2排,如此类推,直至使每孔含半个或一个细胞。培养7~10天后,选择单个克隆生长的阳性孔再一次进行克隆。一般需要如此重复3~5次,直至达100%阳性孔率时即可,以确保抗体由单个克隆所产生。

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