在著名教育家陈鹤琴、吴贻芳的积极倡导下，在江苏省委、省政府的关怀下，南京师范学院附属幼儿师范学校于1953年9月批准建立，成为江苏省第一所独立设置的公办中等幼儿师范，也是建国后人民政府首批创建的幼儿师范之一。

建校当年，校舍尚未建成，教学借用市四女中教室，食宿市教师进修学校，学生睡在地板上，条件十分艰苦。新校舍建成，师生们动手清理杂物，种植花木，美化校园，购置设备，创设良好的教学环境，经过师生们的共同努力，到文革前幼师已经形成规模，为国家已经培养了近两千名合格的幼儿教师。国家副主席宋庆龄还曾为学校十周年校庆题词（原件在文革中遗失）。1972年“文化大革命”中学校被迫停办。

经省政府批准，学校于1981年复办，为省教育厅直属学校，名为江苏省南京幼儿师范学校。1983年更名为江苏幼儿师范学校，同年开办学前教育专科班。1985年根据我国和联合国儿童基金会的合作项目计划，省教育厅确定学校为江苏省幼教培训中心，同年开始设置三、二分段大专班。1988年学校又更名为南京师大附属幼儿师范学校，由省教委和南京师范大学双重管理，1996年起复办三、二分段大专班。1997年省教委确定学校为我省培养大专层次的幼儿园教师的基地，并明确学校为省教委直属学校和直属事业单位。同年，学校全部开设五年制幼师。