更新时间:2023-12-23 20:26
灵芝多糖是多孔菌科灵芝属真菌菌丝体的次生代谢产物,存在于灵芝属真菌的菌丝体和子实体中。灵芝子实体粉碎加入少量培养基发酵,发酵后原料离心,上清液低温真空浓缩,透析,乙醇沉淀,丙酮洗涤,除蛋白,喷雾干燥,最后加入10%水提干粉混合而成。灵芝多糖为浅棕色至棕褐色粉末,可溶于热水。
灵芝多糖是由三股单糖链构成的、具有螺旋状立体构形(三级结构)的葡聚糖,其立体构形与脱氧核糖核酸(DNA)、核糖核酸(RNA)相似,是一种大分子化合物,其分子量从数千到数十万,它是一种从灵芝孢子粉或灵芝中提取的物质。不溶于高浓度的酒精,微溶于低浓度的酒精及冷水,在热水中能全部溶解。灵芝多糖都存在于灵芝的细胞壁内壁。灵芝多糖中除含有葡萄糖外,大多还含有阿拉伯糖、木糖、半乳糖、岩藻糖、甘露糖、鼠李糖等单糖,但含量较少。单糖间糖苷键连接有1,3、1,4和1,6数种。大多为β型结构,少数为α-型结构。α-型多糖没有药理活性(药效)。多数多糖链有分支,部分多糖链含有小分子肤链。多糖链分枝密度高或含有肤链的其药理活性也高。灵芝多糖在水溶液中多糖链一般由三股糖链组成,在 0.1摩/升氢氧化纳溶液中时多糖链的三股糖链离解为单股单糖链。
多糖的药理活性与单糖间糖苷键的结合形式有关。单糖间以β-1,3、1,6或β-1,4、1,6-糖苷键连接是有效的即具有药理活性,而纯 β-1,4-糖背键连接的则没有药理活性。此外,多糖的药理活性还与其立体构形有关,若螺旋形立体结构被破坏,其活性则大大下降。淀粉、纤维素、糊精也是多糖,但其构形与灵芝多糖(或其他真菌多糖)不同。淀粉、纤维素等多糖没有螺旋形立体结构,单糖间的连接全是β-1,4-连接。纤维素是β-型多糖,淀粉、糊精是α-型多糖。由于其构形不同,所以淀粉、糊精、纤维素都没有药理活性。
灵芝多糖是灵芝的最有效成分之一,因此,也特别受到药科技工作者的重视,对它的研究报道也最多。已分离到的灵芝多糖有200多种,其中有数十种的结构已被搞清,分子量已被测定。
灵芝多糖有多方面的药理活性 : 能提高机体免疫力,加速血液微循环,提高血液供氧能力,降低机体静止状态下的无效耗氧量,消除体内自由基,提高机体细胞膜的封闭度,抗放射,提高肝脏、骨髓、血液合成DNA,RNA,蛋白质的能力,延长寿命等。灵芝的多种药理活性大多和灵芝多糖有关。
灵芝多糖的生物活性与单糖的连接方式、分枝度及支链上羟基取代数量、提取剂、多糖中单糖组成和相对分子质量等有关。灵芝多糖是以β-(1→3),β-(1→6)连接或者以β-(1→3),β-(1→4)连接的,且相对分子质量在1×104以上才有生物活性,分枝度高的多糖具有很高的抑癌活性。
降血糖,降血脂,抗血栓,抗氧化,清除自由基,抗衰老,抗辐射,抗肿瘤,促进血流循环,调节免疫,调节核酸、蛋白质代谢,促进DNA合成,促进人体脐血LAK细胞增殖。
由于灵芝多糖具有特有的生理活性和临床作用,且安全无毒,可广泛应用于医药、食品和化妆品行业。基于灵芝多糖可提高机体免疫力,在癌症病人经放疗、化疗机体免疫力受损的情况下,与放疗、化疗配合可达到治愈疾病的目的。另外,灵芝多糖还可抑制过敏反应介质的释放,从而阻断非特异性反应的发生,因此又可抑制手术后癌细胞复发和转移。已投入使用的灵芝制剂有片剂、针剂、冲剂、口服液、糖浆剂和酒剂等,均取得了一定的临床疗效。灵芝多糖作为功能因子可制成保健食品,也可作为食品添加剂加入饮料、糕点、口服液中,这些都极大地丰富了食品市场。由于灵芝多糖具有抗自由基的功效,可用于化妆品中起延缓衰老的作用。
灵芝菌丝体多糖的提取
(一)材料
⒉种子培养基:玉米粉2% 大米粉2%
蔗糖2% 磷酸二氢钾0.1g
硫酸镁0.05% ph值自然
⒊发酵培养基:麦麸浸出液10% 葡萄糖2%
硫酸铵0.2%
磷酸二氢钾0.2% ph值自然
(二)方法 1.种子培养:
⒉发酵培养生产菌丝体。
⒊测定干、湿菌丝体。
将发酵液进行离心,然后取其沉淀物,加入60%蔗糖,进行高速(3000转/分)密度梯度离心5分钟,取上层菌丝体,洗净蔗糖再压干,即得湿菌体,然后再将湿菌体于高温下烘干即为干菌体。分别称取其重量。
⒋多糖的提取。
菌丝体预处理。取适量的灵芝湿菌体,用乙醇等有机溶剂进行处理,以除去湿菌体中的脂类物质,同时使糖苷酶失去活性,防止多糖的降解。
⑵用热水提取多糖。取上面经预处理的灵芝湿菌体,放入1:20的热水(95℃)中浸提,一次3小时,连续浸提3次,合并3次的水浸提液减压、浓缩至一定体积,再用3倍体积的95%乙醇混合,静置10-12小时,再离心,最后加入75%的乙醇反复洗涤,以沉淀多糖。此沉淀物为粗多糖,其中混杂有蛋白质、色素、低聚糖等小分子杂质,一般要经过纯化。
⑶多糖的纯化,去蛋白质和deae纤维素柱层析。去蛋白质一般采用sevag法:加入0.2倍多糖溶液体积的氯仿和0.04倍体积的正丁醇混合振荡半小时进行分离,直至氯仿与水的界面无沉淀为止,且要重复处理2-3次才能有效除去多糖中的蛋白质。多糖纯化一般采用硼酸型deae纤维素柱层析法:取脱蛋白后的多糖,分别以0.025mol/l、0.1mol/l的硼砂,0.1mol/l的氢氧化钠溶液进行洗脱,然后用0.2%恿铜硫酸液比色测定吸收度,收集有多糖的洗脱液,再浓缩脱盐即得所需的多糖。
⑷多糖纯度的鉴定。
可用电泳法进行鉴定,如果存在单一带,说明为纯多糖。
⒌多糖与多糖中蛋白质含量的测定:
取一定量菌丝体粗多糖,加水煮沸溶解,用sevag方法脱去蛋白考马斯亮兰法测其粗多糖中蛋白质和多糖的含量。测得菌丝体中粗多糖含17.01%、多糖含5.43%、蛋白质含量2.16%。
灵芝子实体多糖的提取
(一)材料 1.菌种:韩国灵芝栽培种。
⒉子实体栽培生产料:木屑78%,米糠20%,蔗糖1%,石膏1%,ph值自然。
(二)方法
⒈子实体栽培。
⒉灵芝子实体预处理。
⒊子实体多糖的提取。
取适量的灵芝子实体,捣碎成粉末,用80目筛过筛,然后用热水提取法进行提取。具体操作同菌丝体多糖的提取。提取出的粗多糖含有色素、蛋白质等小分子杂质,也须除去。
⒋去除蛋白质和色素。
子实体粗多糖去除蛋白质也采用se阴法。去除色素,目前尚未发现很理想的方法。一般用乙醇进行反复冲洗,但效果不很理想。
⒌多糖纯度的鉴定。
同菌丝体多糖纯度的鉴定。
⒍子实体粗多糖、多糖及蛋白质含量的测定。
具体方法同菌丝体多糖及蛋白质含量的测定。测得子实体中粗多糖7.5%、多糖1.5%,蛋白质0.6%,其含量均低于菌丝体中的含量。可见菌丝体阶段就形成了灵芝多糖的有效成分,为灵芝液体深层发酵生产菌丝体提供了科学依据。
灵芝多糖由三股单糖链构成,其构型与DNA、RNA相似,是一种螺旋状立体构型物,螺旋层之间主要以氢键固定。灵芝多糖在单糖组成、糖苷键构型、分子量、旋光度、溶解度等某些理化性质方面存在显著差异。在已提取到的有200多种灵芝多糖中,大多数是异多糖,即除含有葡萄糖外,还含有半乳糖、甘露糖、阿拉伯糖、木糖、岩藻糖、鼠李糖等其它单糖;由于来源不同,分子量可从数万到数十万不等,多数伴有分支,部分多糖还含有肽链。
灵芝多糖体对温度很敏感,是热敏性物质,大多不溶于高浓度酒精,而溶于热水。温度升高,会引起灵芝多糖的降解,多糖体中糖苷键易断裂而形成多个唐单体,而唐单体是没有活性的。现今提取灵芝多糖多采用膜分离法,整个过程在密闭系统中进行,无需加热,避免和减轻了热和氧对灵芝多糖营养成分的影响。
灵芝结构紧密,具有较好的维持力,灵芝多糖存在于细胞壁内,较难渗出。研究人员利用超声波高频振荡产生“空化效应”能破灵芝结构的维持力,是灵芝的结构层发生变化,扩大透析膜径,使细胞壁上的多糖尽快释放。
【性状】本品为棕褐色或棕黄色粉末,易吸湿 ,易溶于水
【重金属指标】As<0.3ppm Cd<0.5ppm Pb<1.0ppm Hg<0.2ppm
【卫生指标】 细菌数 < 1000个/g 大肠杆菌、活螨不得检出霉菌数 < 100个/g 干燥失重 ≤9%。
【多糖含量】10%-40%。