盐城人。明末贡生，他精通经史，博学多才。1644年，明崇祯皇帝自缢，清兵入关，著名抗清爱国将领史可法督师扬州，抵抗清军，设招贤馆，广收人才，王之桢前去，积极辅佐史可法，献了著名的抗清十策，深得史的赏识，在幕中掌握机密文书。当清军包围扬州、劝史可法归降时，王之桢挺身而出，以史的名义回答清军头领多尔衮，申明大义，严词拒降。这封《答多尔衮书》十分著名，一直为后代传颂。