王少楼四岁随父王德山（梆子演员）学艺，曾拜周信芳为师。十一岁随父在杭嘉湖一带经常演出《落马湖》《独木关》《连环套》，己深得观众喜爱。十七岁开始在杭州挂牌演出，头三天打炮戏为《长坂坡》《挑滑车》《恶虎村》，一炮打响。，是继郑立恒、施子健之后，杭嘉湖水路班武生中的头号人物。

青年时候的王少楼作为五大头牌进入上海大舞台，当时演出的剧目有《铁公鸡》《盗魂铃》《金钱豹》《周喻归天》《战马超》《十八罗汉收大鹏》《驱车战将》《英雄走国记》《牛郎织女》《收姜维》等，并经常在南京、武汉、杭州、苏州、无锡等地巡迥演出。

新中国成立之初，成立了共舞台京剧团，有演员200多人，54年改为上海新华京剧团，王少楼任团长和主演。领导剧团编演了23本《水泊梁山》，在50年上海笫一届春节戏曲演唱竞赛获一等奖。解放后编演大量新戏有《九件衣》《五虎平西》《薛刚闹花灯》《忠王李秀成》《张汶祥刺马》《黄飞虎反五关》《岳飞》《还我台湾》，和现代戏《黎明的河边》《唱戏的人》等。57年春节开始演出头本《封神榜》，该剧演止七本，盛况空前。当年下半年去北京、天津、济南巡迥演出，扩大了连台本戏在北方的影响。64年编演《龙江颂》并主演支部书记郑强。65年参加了华东区京剧现代戏会演，受到一致好评。