更新时间:2023-11-26 13:47
近代生物化学研究的发展已从细胞水平、亚细胞水平,深入到生物大分子水平,甚至能研究分子内的结构与功能关系,能进行分子的改造和重建以改变生物性状。生物化学研究的任一突破性进展,无不与新的实验技术方法的创建密切关联。
没有超速离心技术的发展,具有生物学活性的亚细胞组分的分离是不可能的。电泳方法是一类重要的生物化学技术,现在不仅能借电泳以分离制备较大规模的生物大分子,还能从单一样品中,分辨出成百上千的不同蛋白质组分或核酸片段。毛细管电泳的问世,更使分析微量化到1nl水平。在临床医学中,电泳可帮助分析各种脂蛋白成分,使各种高脂蛋白血症得以区别;以电泳分析同工酶成分或酶谱,得以区分其所来源的病变组织或疾病的不同发展阶段。基因重组技术在生物科学中已掀起一场划时代的革命。现在在实验室里就可随意剪切拼接基因,可人工合成基因,并将其引入细胞中以指导合成相应的新蛋白质,改变细胞的遗传性状。临床上已应用基因探针以诊断某些遗传性疾病、恶性肿瘤和乙型肝炎等。
生物化学实验技术的主要特点是:①操作温和,使对所研究组分的天然结构和功能的损害,尽可能减少至最小。②微量或痕量分析,低达ng或pg水平;或大量分离制备,高达公斤级。③分辨率高,可明确区分结构或性质极其相似的物质。
重要的现代生物化学实验技术,按其目的和性质大致可分为三大类。
一是按不同的物理化学性质进行分析鉴定和分离制备,其中又可分为五类:①根据分子的大小进行分辨者,有凝胶过滤法、超速离心法、超滤法、 SDS电泳分析等。②根据分子荷电情况进行分辨者,有等电聚焦电泳法、离子交换层析法等。③根据吸收光谱和放射性等性质进行分辨者,有紫外/红外/荧光分光光度法、X射线结构分析法、电子顺磁共振,电子自旋共振和核磁共振法,以及放射性核素示踪和放射免疫分析法等。④根据疏水相互作用或氢键形成的引力进行分辨者,有反相高效液相层析、分子杂交技术等。⑤根据特异相互作用进行分辨者,有亲和层析、免疫化学分析法等。
二是经一系列不同的化学和物理方法处理,以求得差异分辨,或按指令合成不同的高分子物质。如氨基酸序列分析和序列合成、核苷酸序列分析和序列合成等。
三是有目的地对 DNA进行剪切拼接,引入细胞中的(或分子克隆技术)和等。
为使这些生物化学技术实现高效自动化、灵敏精确重复性好、特异性高,人们设计了一系列有微机控制的高性能仪器,使生物化学实验技术更臻完善。必须强调指出的是,技术方法是十分重要的实验手段,但更重要的是科学家运筹帷幄的战略设计。只有巧妙地利用不同的生物化学实验技术,方能达到预期的研究目的。