直接筛选

更新时间:2024-05-21 15:11

直接筛选即用基因组DNA直接从cDNA文库中筛选位于该基因组片段内的cDNA,如从覆盖有候选区域的YAC、PAC、BAC克隆中分离外源片段作为探针从文库中筛选候选基因;而cDNA选择法恰恰与直接筛选法相反,它把基因组DNA固定在膜上,用总cDNA与之杂交,通过PCR从中回收可与基因组片段结合的cDNA片段。

缺点是大片段地纯化,标记较困难,而PAC、BAC克隆片段纯化相对方便的优点就成为这种方法发展的趋势;同时由于探针的复杂性,使杂交背景加深,假阳性增多,而且容易忽略短的外显子或低丰度cDNA。cDNA选择法的最大优越性在于PCR反应的介入,大大提高了选择的灵敏度,可以检测到一些稀有转录子。

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