穿刺培养，是指将带有欲培养微生物的接种针深插至半固体培养基（琼脂含量0.2%〜1.0%）中接种，并进行微生物固体深层培养的一种方法，主要用于厌氧或兼性厌氧微生物的培养。接种时，用接种针（尖部挺直的）蘸取少量菌苔，自固体深层培养基表面的中心点垂直穿刺，直到培养基底部，然后轻轻退出，保持接种线整齐。接种完毕后，静置培养，然后可根据穿刺部分菌落的生长和扩散状况来判断该微生物的运动性能和对氧气的需求状况。