常用的方法有：

①20天剂量递增蓄积系数法,以4天为一期，第一期每只动物每天给药剂量为0.1LD50，以后各期顺次递增50%（第二期为每只每天0.15LD50 ，第三期为每只每天0.225LD50 ,依次类推），直至该性别动物死亡一半（10只），或继续给药至累计剂量达5.0LD50以上（20d）为止。

②20天蓄积试验法，成年大鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半。各组剂量分别为LD50的1/20、1/10、1/5、1/2，另设溶剂对照组。每天灌胃一次，连续20天。然后观察7天。如1/20 LD50组已出现死亡，且各剂量组动物死亡呈剂量-反应关系，则受试动物有强蓄积毒性。如1/20 LD50组无死亡，但各剂量组死亡呈剂量-反应关系，表明有中等蓄积毒性。如1/20 LD50组无死亡，各剂量组死亡无剂量-反应关系，可认为无明显蓄积毒性。