弗洛里出生于澳大利亚南部的阿德雷得，是家中5个小孩中的老么。从1917年到1921年间，他在阿德雷得大学研读医学。1924年弗洛里男爵在罗德奖学金的赞助下，取得牛津大学硕士学位。1927年在剑桥大学获得PhD学位。1965年到1968年间，他在澳洲国立大学担任校监。

弗洛里最初的工作是研究溶菌酶，发现人类的眼睛和唾液存在着一种会破坏细菌的物质，成功地净化溶菌酶。自从1928年亚历山大·弗莱明（1881—1955）发现青霉素以后，并未使用于临床。1939年，弗洛里和恩斯特·伯利斯·柴恩（1906—1979）调查自然发生的抗菌物质， 重复了弗莱明的工作，然后提纯了青霉素，1941年成功地使用于病人，1945年以后全世界广泛地应用了青霉素。为此，弗莱明、弗洛里、柴恩三人共获1945年诺贝尔生理学或医学奖。1949年弗洛里编辑出版了《抗生素》一书。