2.2.2 种子批的建立

应符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。

2.2.2.1 原始种子批

Sabin株原始毒种I、Ⅱ、Ⅲ型及中Ⅲ2株均由毒种研制者制备和保存。

2.2.2.2 主种子批

由原始毒种在胎猴肾或人二倍体细胞上传1～2代制成的成分均一的一批病毒悬液称为主种子批。

Sabin株主种子批的传代水平为SO十1；中Ⅲ2株主种子批的传代水平为中Ⅲ2 1代；Ⅲ型pfizer株主种子批为RSO1。

2.2.2.3 工作种子批

取主种子批毒种在人二倍体细胞上传1～2代制备的组成均一的一批病毒悬液称为工作种子批。

2.2.3 毒种传代

从原始种子批到工作种子批的传代次数，Sabin I型、SabinⅡ型和其他纯化株以及中Ⅲ2株不得超过3代；sabinⅢ型及其他纯化株包括pfizer株不得超过2代。 制备生产用种子批所用的细胞应限于眙猴肾或人二倍体细胞。

2.2.4 种子批毒种的检定

除另有规定外，主种子批及工作种子批应进行以下全面检定。

2.2.4.1 鉴别试验

取适量I型、Ⅱ型或Ⅲ型单价脊髓灰质炎病毒抗血清与适量病毒供试品混合，置35～37℃中和1～2小时，接种Hep-2细胞或其他敏感细胞，置适宜温度(35～36℃)培养，7天判定结果，病毒型别应准确无误。同时设血清和细胞对照，均应为阴性。病毒对照应为阳性。

2.2.4.2 病毒滴定

采用微量细胞病变法。取毒种做10倍系列稀释，每稀释度病毒液接种Hep-2细胞或其他敏感细胞，置适宜温度(35～36℃)培养，7天判定结果。病毒滴度应不低于6.5 lg CCID〈[50]〉/ml。应同时进行病毒参考品滴定。

2.2.4.3 无菌检查

依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。

2.2.4．支原体检查

依法检查(附录ⅫB)，应符合规定。

2.2.4.5 病毒外源因子检查

依法检查(附录ⅫC)，应符合规定。

2.2.4.6 家兔检查

取毒种进行此项检查。如不立即进行试验，毒种应保存于-20℃以下。取体重为1.5～2.5kg的健康家兔至少5只，每只注射10ml，其中1.0ml皮内多处注射，其余皮下注射，观察3周，到期存活动物数应不低于80%，无B病毒和其他病毒感染判为合格。家兔在24小时以后死亡，疑有B病毒感染者应尸检．须留神经组织和脏器标本待查，用脑组织做10%悬液，用同样方法接种5只健康家兔进行检查。

2.2.4.7 免疫原性检查

用工作种子批毒种制成原疫苗，按常规接种易感儿童(免前抗体效价<1:4)至少30名，分别于免疫前及免疫后4周采血，测定中和抗体，免疫后抗体阳转率应不低于95%。

2.2.4.8 猴体神经毒力试验

依法检查(附录ⅪL)，应符合规定。

2.2.4.9 rct特征试验

将单价病毒液分别于360℃± 0.1℃及400℃± 0.1℃进行病毒滴定，试验设t-对照(生产毒种或已知对人安全的疫苗)。如果病毒液和t-对照在36℃±O．1℃的病毒滴度与40℃±0.1℃的滴度差不低于5.0 1g，则rct特征试验合格。

2.2.4.10SV40核酸序列检查

依法检查(附录IX H)，应为阴性。

2.2.5 毒种保存

液体毒种需加入终浓度为lmol/L的氯化镁溶液，置-60℃以下保存。

2.3 原液

2.3.1 细胞制备

同2.1.2项。

2.3.2 培养液

细胞的培养液为含适量灭能小牛血清和乳蛋白水解物的MEM液或其他适宜培养液。小牛血清的质量应符合要求(附录ⅧD)。病毒维持液为不含小牛血清的MEM液或其他适宜维持液。

2.3.3 对照细胞病毒外源因子检查

依法检查(附录ⅫC)，应符合规定。

2.3.4 病毒接种和培养

毒种与细胞按一定比例接种。种毒后置33℃±0.5℃培养40～96小时至细胞出现完全病变后收获。

2.3.5 病毒收获

病毒液逐瓶澄清过滤，收集于大瓶中，即为单价原液。

2.3.6 原液合并或浓缩

原液可合并或浓缩。

2.3.7 原液检定

按3.1项进行。

2.4 半成品

2.4.1 配制

单价原液加入氯化镁，其终浓度为1mol/L，即为单价疫苗半成品。取适量I、Ⅱ、Ⅲ型单价疫苗半成品，按一定比例进行配制，即为三价疫苗半成品。

2.4.2 半成品检定

按3.2项进行。

2.5 成品

2.5.1 疫苗糖丸制备

三价疫苗半成品及赋形剂按一定比例混合后制成糖丸。滚制糖丸时，操作室内温度应在18℃以下。

2.5.2 分批

应符合“生物制品分批规程”规定。同一次混合的三价疫苗半成品制备的糖丸为一批，非同容器滚制的糖丸分为不同亚批。

2.5.3 分装

应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。

2.5.4 规格

每粒1g。每1次人用剂量1粒，含脊髓灰质炎活病毒总量应不低于5.95 lg

CCID〈[50]〉，其中I型应不低于5.81g CCID〈[50]〉，Ⅱ型应不低于4.8 Ig

CCID〈[50]〉，Ⅲ型应不低于5.3 lg CCID〈[50]〉。

2.5.5 包装

应符合“生物制品包装规程”规定。

3.1 原液检定

3.1.1 鉴别试验

按2.2.4.1项进行。

3.1.2 病毒滴定

按2.2.4.2项进行，病毒滴度应不低于6.51g CCID〈[50]〉/ml。

3.1.3 猴体神经毒力试验

依法检查(附录Xl L)，应符合规定。

3.1.4 无菌检查

依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。

3.1.5 支原体检查

依法检查(附录ⅫB)，应符合规定。

3.2 半成品检定

3.2.1 病毒滴定

按2.2.4.2项进行。三价疫曲病毒滴度应不低于7.15 lg CCID〈[50]〉/ml，其中I型应不低于7.01g CCID〈[50]〉/m1，Ⅱ型应不低于6．O lg CCID〈[50]〉/m1，Ⅲ型应不低于6.5 lgCCID〈[50]〉/m1。

3.2.2 无菌检查

依法检查(附录ⅫA)，应符合规定。

3.3 成品检定

每个亚批取200～300粒。

3.3.1 鉴别试验

取适量I、Ⅱ、Ⅲ型三价混合脊髓灰质炎病毒抗血清与适量本品混合，置35～37℃中和1～2小时，接种Hep-2细胞或其他敏感细胞，置适宜温度(35～36℃)培养，7天判定结果，应无病变出现。同时设血清和细胞对照，均应为阴性。病毒对照应为阳性。

3.3.2 外观

应为白色固体糖丸。

3.3.3 丸重差异

取糖丸20粒测定，每1粒重量为1g±0.15g。

3.3.4 病毒滴定

每3～4亚批合并为1个检定批，取100粒糖丸，加Earle’s液至1000ml，即为1：10稀释度，取适宜的稀释度用病变法进行病毒滴定。

三价疫苗糖丸以混合法测定病毒含量，同时应以中和法检测各型病毒含量。采用中和法需预先精确测定异型抗体的交叉抑制值，以校正滴定结果。按2.2.4.2项测定病毒滴度，每剂三价疫苗糖丸病毒总量应不低于5.95 lg CCID〈[50]〉，其中I型应不低于5.8 1g CCID〈[50]〉，Ⅱ型应不低于4.8 lg CCID〈[50]〉，Ⅲ型应不低于5.3 lg CCID〈[50]〉。

3.3.5 热稳定性试验

疫苗出厂前应进行热稳定性试验，应与病毒滴定同时进行。37℃放置48小时后，按2.2.4.2项进行病毒滴定，病毒 滴度应不低于5.0 lgCCID〈[50]〉，病毒滴度下降应不高于1.0 lg。

3.3.6 病毒分布均匀度

每批抽查糖丸10粒以上，测定疫苗糖丸的病毒分布均匀度。逐粒滴定病毒含量，各粒之间的病毒含量差不得超过0.5 1g。

3.3.7 杂菌数检查

同一天滚制的糖丸为1个供试品，每个糖丸滚制容器中取样不得少于10粒，每粒杂菌数不得超过300个。

3.3.8 致病菌检查

不得含有乙型溶血性链球菌、肠道致病菌或大肠杆菌。

3.3.8.1 乙型溶血性链球菌检查

取经10倍稀释的本品0.5ml，接种肉汤培养基1支，置37℃培养24小时，再用划线法移种血平皿1个，37℃培养24小时，应无乙型溶血性链球菌生长(如原料、辅料已做过此项检查并合格，成品可不再做)。

3.3.8.2 肠道致病菌检查

取经10倍稀释的本品1.0ml，接种GN或肉汤增菌培养基1管，置37℃培养，于6～24小时内用划线法转种鉴别培养基平皿1个，37℃培养24小时，如有革兰阴性杆菌，应进一步鉴定是否为肠道致病菌。

3.3.8.3 大肠杆菌检查

取经10倍稀释的本品，接种普通克斯列或麦康凯肉汤培养基3管，每管2ml，置37℃培养48小时，不应有产酸、产气现象。如有产酸、产气现象，应进一步鉴别是否为大肠杆菌。

自病毒滴度检定合格之日起，于-20℃以下保存，有效期为2年；于2～8℃保存，有效期为5个月。运输应在冷藏条件下进行。标签上只能规定一种保存温度和有效期。

脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸(人二倍体细胞)使用说明

【药品名称】

通用名称：脊髓灰质炎减毒活疫苗糖丸(人二倍体细胞)

英文名称：poliomyelitis(Human Diploid Cell)，Live

汉语拼音：Jisuihuizhiyon Jiandu Huoyimiao Tangwan(Ren Erbeiti Xibao)

【成分和性状】本品系用脊髓灰质炎病毒I、Ⅱ、Ⅲ型减毒株分别接种于人二倍体细胞，经培养、收获病毒液后制成。为白色固体糖丸。

【接种对象】主要为2个月龄以上的儿童。

【作用与用途】本疫苗服用后，可刺激机体产生抗脊髓灰质炎病毒免疫力。用于预防脊髓灰质炎。

【规格】每粒糖丸重1g。每1次人用剂量1粒，含脊髓灰质炎活病毒总量应不低于5.95 lg CCID〈[50]〉，其中I型应不低于5.8 lg CCID〈[50]〉，Ⅱ型应不低于4.8 lg CCID〈[50]〉，Ⅲ型应不低于5.3 lg CCID〈[50]〉。

【用法用量】基础免疫为3次，首次免疫从2月龄开始，连续口服3次，每次间隔4～6周，4岁再加强免疫1次，每1次人用剂量1粒。其他年龄组在需要时也可以服用。

【不良反应】口服后一般无副反应，个别人有发热、恶心、呕吐、腹泻和皮疹。一般不需特殊处理，必要时可对症治疗。

【禁忌】(1)发热、患急性传染病者。

(2)患免疫缺陷症、接受免疫抑制剂治疗者。

(3)妊娠期妇女。

【注意事项】(1)本品只供口服，禁止注射。

(2)本品系活疫苗，应使用37℃以下的温水送服，切勿用热水送服。

【贮藏】-20℃以下或2～8℃避光保存和运输。

【包装】

【有效期】-20℃以下有效期为2年；2～8℃有效期为5个月。(标签只能规定一种保存温度及有效期。)

【别名】

小儿麻痹症活疫苗糖丸，脊髓灰质炎活疫苗、口服脊髓灰质炎减毒活疫苗

英文名:Poliomyelitis　Vaccine,Live　(Oral　)

汉语拼音:koufu jisuihuizhiyan jianduhuoyimiao

【规格】

本品剂型为糖丸，每人用剂量为1g重糖丸1粒，所含活病毒总量为5.95LgTCID50（或PFU），其中Ⅰ型为5.8LgTCID50（或PFU）、Ⅱ型为4.8LgTCID50（或PFU）、Ⅲ型为5.3LgTCID50（或PFU）。

【质量标准】

本品依据《中国生物制品规程》2000年版标准生产和检定，符合质量要求。

【作用与用途】

本疫苗口服免疫后，可刺激机体产生抗脊髓灰质炎病毒免疫力，用于预防脊髓灰质炎。

【作用】：服用脊灰疫苗，是预防脊髓灰质炎发生的特异性免疫措施。

【疫苗简介】：我国使用的脊灰疫苗是减毒活疫苗，是混合糖丸疫苗。糖丸疫苗需用奶粉、奶油、葡萄糖等材料作辅剂，将液体疫苗滚入糖中，即糖丸疫苗。糖丸疫苗为白色，对热非常敏感。属于国家免疫规划的第一类疫苗。

【接种对象与免疫程序】：出生满2个月开始服糖丸，每次服1粒，连服3次，每次间隔≥28天，4岁复服一次。其他年龄组在需要时也可以服用。

【服用方法】：用消毒的药匙将糖丸送入儿童口中，用凉开水送服咽下；月龄小的儿童，可将糖丸碾碎，放入药匙中加入少许凉开水溶解成糊状服用，或将糖丸溶于5ml凉开水中，使其完全溶化口服咽下。

【储存与运输】：脊灰疫苗对热敏感，低温条件下比较稳定，应在－20℃～8℃的条件下运输和避光保存。

【禁忌症】：一般无特殊禁忌症。烧、患急性传染病、免疫缺陷症、接受免疫抑制剂治疗者及孕妇忌服；对发热、急性疾病、慢性疾病活动期和重度腹泻的儿童应缓用；对牛奶过敏者应慎用。

【服苗反应】：该疫苗比较安全，无严重的不良反应。个别儿童服苗后1～2天内出现发热、恶心、呕吐、腹泻等，偶尔有皮疹，2～3天内不需要治疗可自愈。症状重者可对症治疗。

【服苗时注意事项】：（1）本品只供口服，不能注射。

（2）本品系活疫苗，切勿加在热开水或热的食物内服用。服食前后30分钟内不能喝、吃热饮料热食。

【免疫效果】：经多年的实践证明，脊灰疫苗的免疫效果是非常明显的，在控制和消灭脊灰工作中起到十分重要的作用。

【保存、运输及使用期限】

自疫苗糖丸检定合格之日起，-20℃以下保存有效期为2年，4～8℃保存有效期为5个月。运输应在冷藏条件下进行。在盒签标明的有效期内使用。

【剂型】诊断试剂

【贮藏】在2～8℃的暗处保存

【规格】1ml(10人份)

【批准文号】国药准字S20003029

【生产企业】中国医学科学院医学生物学研究所