3.水为重蒸水

4.栀子苷对照品(中国药品生物制品检定所)

仪器设备： 1 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅胶键合硅胶为填充剂，Kromasil C18(250×4.6mm，5um)，理论板数按栀子苷计应符合规定。

1.3可变波长紫外检测器

1.4 色谱工作站

1.5 超声发生器

2 色谱条件

2.1 流动相：甲醇+乙腈=10+90

2.2流速：1.0ml/min

2.3检测波长：238nm

2.4 柱温：室温

试样制备： 1. 对照品溶液的制备

取栀子苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含0.298mg的溶液，即得对照品溶液。精密量取栀子苷对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5ml，分别置于5ml 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。

2. 供试品溶液的制备

取本品10g，研细，过20目筛，精密称取约1.2g，置于50mL具塞锥形瓶中，加甲醇25mL，密塞，称定重量。超声处理20min，放冷至室温，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀。精密量取溶液10mL分别置于25mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，即得供试品溶液。

操作步骤： 1. 标准曲线的制备

精密吸取20ul，注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量X为横坐标，峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为：y=494747X-1511.3，r=0. 9997(n=5)，线性范围为0.596-2.980mg。

2. 供试品的测定

精密吸取供试品溶液20μL注入高效液相色谱仪测定峰面积，外标法计算栀子苷的含量。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

参考文献： 卢兴红，张兰桐，反相高效液相色谱法测定栀子及其制剂中栀子苷的含量，中国药房，2003，14(12)：748～750。

栀子来源于茜草科Rubiaceae植物栀子Gardenia jasminoides Ellis的干燥成熟果实。栀子中含有40余种生理活性物质, 其中为国内外所公认的中药栀子有效成分为环烯醚萜类物质。栀子所含的环烯醚萜类物质包括栀子苷、京尼平苷、羟异栀子苷、栀子苷酸等,其中活性成分最高的是栀子苷和京尼平苷。栀子苷又是生产栀子蓝、栀子红、栀子紫的中间体和生药品的有效单体。因此, 对栀子苷的分离、纯化、结晶和含量测定成为对栀子深度开发的关键技术。对栀子苷的分离可以与α - 藏花素的分离同步进行。较为成熟的方法是采用大孔树脂吸附解吸的技术。选用的树脂多为弱极性和无极性, 如HP20、XAD22、HPD2100、X25 、NKA等等。文献报道栀子苷的提纯方法主要有: 铅盐沉淀法、活性炭除杂法、硅胶吸附法等。通过比较研究得出的初步结论是, 上述方法作为研究尚可,但无法进行工业化生产。其主要问题在于: 工艺复杂、物耗过大、收得率低, 而且大量使用有毒有害的试剂,如乙醚、氯仿、甲醇、丙酮、铅盐等。不符合食品、药品的生产规范。而采用柱层析法则完全可以达到栀子苷纯化的目的。选用安全、无毒、合适的固定相和流动相, 在一定的吸附量、温度、pH、流速、流量等条件下, 可以有效地将栀子苷的含量由50%纯化到95%左右, 为栀子苷的结晶创造必要的条件。栀子苷含量的测定方法有薄层紫外法 、薄层扫描法、高效液相色谱法等,薄层紫外法和薄层扫描法准确度不高, 高效液相色谱法是对栀子苷准确、快速的定量测定方法,为其质量标准的制定。