1454年，马里奥的弟弟乔瓦尼决定搬去佛罗伦萨从事银行业，而此时他们父亲也已过世，马里奥就独自担任起统治蒙特里久尼的重担。马里奥一直留在庄园中，并与乔瓦尼书信联系。在这样一封信件中，马里奥这样解释自己留在蒙特里久尼的原因，他说他“更喜欢像男人一样战斗，而不是填写资产损益表。”这也暗示他们在这之后很少见到彼此。

蒙特里久尼在马里奥的统治下经历了一段时期的繁荣。他在城中建立起了数家店铺和工会，还强化了城市的防御以抵挡佛罗伦萨的进攻。1454年，他发现一名佛罗伦萨间谍头目卢西亚诺·佩扎蒂就在蒙特里久尼城中。他召集他自己的雇佣兵们与佩扎蒂及其手下展开了战斗。

马里奥与卢西亚诺决斗，勉强战胜了他，并将他俘虏抬回了奥迪托雷别墅。从间谍那里得知的信息中，马里奥得知佛罗伦萨正在派遣佣兵将领费代里科·达·蒙泰费尔特罗领导对蒙特里久尼的袭击。然而在马里奥的领导下，针对这座城市的入侵阴谋以失败告终。

最后，卢西亚诺·佩扎蒂透露这次围城后的真相，佛罗伦萨攻击蒙特里久尼是为了寻找某个神秘的古代遗物。马里奥对此物感到好奇，召集了他的建筑师与历史学家，最终发现这座城市曾经被翻修过，而水井曾被抽干以及挖掘过。

马里奥带着一些矿工和自己的手下进入了水井。起初他们没找到任何事物，但马里奥发现当矿工的火把移动到后方的墙上时会出现闪动，意味着这里有一个出口。他们一同推开了墙壁，发现了一个隐藏的走廊，里面充满了各种致命陷阱。许多人因为落入陷阱而失去生命，而马里奥自己也被一个钟摆击中失去了左眼，并在脸上留下一道伤疤。

尽管伤痕累累，这个小队最终还是找到了一个木质的盒子。盒子中有个未知的存在在告诉马里奥和士兵们，“伤痛只是暂时的”，并让他们“忽略它”。马里奥的手下都相信这个存在能够治愈他们的伤，但马里奥鉴于这个盒子被安置在此处这么久，相信一定有被放在这里的原因，而现在打开它是不明智的。

而这时，马里奥的手下发动了哗变，而他也不得不将他们打倒。尽管受着盒中之物持续的诱惑，他还是一直忍着不去打开盒子。他无视了那个遗物提出治愈他的条件，并将其带到了奥迪托雷别墅。他呼唤乔瓦尼将它带走，将其视为“兄弟会的问题”了，然后这个盒子之后在别墅短暂停留之后，被移交给了兄弟会。

家庭团聚

1476年，乔瓦尼以及他的两个儿子费代里科和彼得鲁乔以叛国罪的莫须有罪名被处以死刑。而处刑是由意大利圣殿骑士的最高大师罗德里戈·波吉亚暗中指示的。而当乔瓦尼幸存的儿子艾吉奥护送母亲玛丽亚和妹妹克劳迪娅·奥迪托雷安全逃出佛罗伦萨后，他们来到了蒙特里久尼。

就在三人即将抵达蒙特里久尼的时候，他们遭到了维耶里·德·帕齐及其手下士兵的伏击。在他的侄儿和那帮人战斗正酣的时候，马里奥带着雇佣兵出现并击败了帕齐，之后他们一同回到了蒙特里久尼。马里奥再次向艾吉奥透露了他的刺客血统传承，并告诉他他需要训练以便将来能够与圣殿骑士们作战，并保护他的母亲和妹妹。

马里奥开始了对艾吉奥的刺客训练，教会他缴械、反击等格斗技巧，军事战术，以及如何嘲弄敌人。1478年，艾吉奥宣称他决定带着母亲和妹妹前去西班牙，而这和马里奥的期望违背。出于对刺客血统的自尊心，马里奥愤然离去，在艾吉奥重新思考自己的决定之前，就带兵去了圣吉米尼亚诺。

艾吉奥感到有些自责，便追随马里奥也去了圣吉米尼亚诺，帮助他杀掉了维耶里·德·帕齐。当艾吉奥成功地刺杀维耶里并开始辱骂他的尸体时，马里奥出面制止，他告诫艾吉奥应该尊重死者。接着，马里奥示范了刺客对待死者的方式：他走近维耶里的尸体，简短的独白后，用手合上了维耶里的眼睛。

回到蒙特里久尼，马里奥的手下开始庆祝他们的胜利，而马里奥自己带着艾吉奥去了隐藏在别墅地下的圣堂，这里记载着刺客们的记忆和传承。同时，他也把手札的重要性告诉了艾吉奥。马里奥一边向艾吉奥谈论自己和乔万尼这些年收集破译的手札，一边将他从维耶里那里缴获的密函放到了密函墙上。

后来，马里奥发现艾吉奥在玛丽亚的卧室中安放收集到的羽毛，试图激励母亲再次开口说话。当他看到艾吉奥放够了50枚羽毛的时候便前来插话，希望他不要再做这种“徒劳无功”的事情了，接着告诉他他在城中的铁匠铺中留了一把新的武器给他使用。

获得金苹果

“别担心，侄子（nipote）！你不是一个人在战斗！”

―马里奥和其他刺客赶来帮助艾吉奥

1488年，马里奥与其他刺客组织的领导层成员在威尼斯碰面，计划从罗德里戈那里夺取已知当天会被送来的“苹果”。当他们找到罗德里戈的时候，他们发现他和他的手下正在与艾吉奥鏖战。

刺客们立即冲上去帮助艾吉奥，他们共同打败了罗德里戈的卫兵，并几乎要杀掉了他，然而这名圣殿骑士的领袖还是成功死里逃生，留下了苹果。之后，马里奥告诉艾吉奥说曾经帮助过他的那些人其实都是刺客，这让他非常惊讶。就在那一晚，刺客团队在城市的一个塔顶会头，共同举行了艾吉奥的入会仪式。

在得到这件伊甸碎片之后，马里奥与尼可罗·马基雅维利、莱昂纳多·达·芬奇以及艾吉奥开始共同研究它。当苹果被激活之后，马里奥和尼可罗都被这件古代遗物所影响，头痛欲裂，几欲瘫倒。而艾吉奥和莱昂纳多几乎没受太大影响，只是被它发出的光芒闪到了眼睛。

于此，马里奥意识到苹果中含有强大的能量，并警告艾吉奥要保护好它，敦促他将它放到弗利的拉瓦迪诺堡垒交给盟友卡泰丽娜·斯福尔扎保护。当他们分别的时候，马里奥还要求莱昂纳多前来拜访蒙特里久尼的奥迪托雷别墅。

1498年，当艾吉奥正致力于将佛罗伦萨从吉罗拉莫·萨沃纳罗拉的统治下解放出来时，马里奥也来到了城市并目睹了侄子刺杀了这名修士，以及之后艾吉奥对佛罗伦萨民众的演讲。

也是在这段时期，艾吉奥也请求叔叔前往西班牙，以他的经验以及他与佣兵圈子中的影响力去帮助他的西班牙同志们，而马里奥同意了。

前往罗马

“把它交给他人，不如就让它归于大地。”

―马里奥评论权杖

1499年12月，马里奥、艾吉奥和其他一些刺客在蒙特里久尼的奥迪托雷别墅中集会，想找出藏在阿泰尔手札中的预言。在艾吉奥整理好所有的手札之后，刺客们发现手札中隐藏了一份标示了所有神殿位置的世界地图。艾吉奥注意到最近的神殿就在梵蒂冈，而罗德里戈·波吉亚已经成为了教皇，以让他轻易进入神殿以及得到另一件伊甸碎片——教皇权杖。

艾吉奥立刻前往罗马去刺杀罗德里戈并进入密室，而马里奥和其他刺客们则是在城内干扰教皇军队，引开他们。在艾吉奥和罗德里戈交战结束后，他饶了罗德里戈一命，将苹果和权杖组合在一起，用它们的力量打开并进入了密室。在他和一名第一文明成员密涅瓦交流之后，他回到了大厅。

之后艾吉奥试图拔出权杖，但它被神殿拉入了地下，并触发了机关。此时，马里奥赶到了西斯廷礼拜堂与艾吉奥碰面，对侄子说权杖与其“把它交给他人，不如就让它归于大地。”当艾吉奥从机关中出来之后，两人一路杀出梵蒂冈，来到了台伯河边。

他们到了河边时，马里奥建议艾吉奥把苹果扔进河里，但艾吉奥下不定这个决心。于是马里奥接过苹果，向他保证自己会保管好它，直到她拿定主意。

蒙特里久尼围城战和马里奥的牺牲

艾吉奥：“伯父……你小心点。”

马里奥：“我会的。”

―马里奥和艾吉奥的最后对话

1500年元旦的下午，艾吉奥和马里奥骑马回到了蒙特里久尼。当他们将要走到城门的时候，马里奥听完了艾吉奥讲述他在神殿密室中的见闻，而马里奥建议艾吉奥，预言说明的时期将发生在遥远的未来，而此时的他们无须为此操心。

这时一发加农炮的炮弹击中了艾吉奥不远处的地方，吓了他一大跳。马里奥随即也告诉他他也在蒙特里久尼的城垛安装了新的大炮，加固了城镇的防御。

两人骑马进入小镇后，镇民们都在对他们于梵蒂冈取得的胜利表示祝贺，而马里奥回到别墅之后，艾吉奥也开始享受他获得的新的充裕的时间。

之后马里奥与家人、尼克罗·马基雅维利以及卡泰丽娜·斯福尔扎都被艾吉奥召集至书房，被讲述他在密室中的发现。艾吉奥解释说他遇到了“栩栩如生的画像般的”密涅瓦女神全息图影，而密涅瓦警告他即将发生的大灾变以及能够拯救人类的神庙。但接着她对一个不存在的戴斯蒙德说话，好像就在他身旁一般。马里奥思索着这一切意味着什么。

马基雅维利转变了话题，询问罗德里戈的命运，而艾吉奥回答说他饶恕了那个西班牙人。马基雅维利听后十分震怒，斥责说犹豫就会败北，果断不会白给，接着就赶忙动身前去罗马。而马里奥告诉艾吉奥，虽然他不知道为什么他要饶了罗德里戈，但他相信艾吉奥的判断。马里奥接着也说马基雅维利会明白这一点。

新年的第二天，正好是克劳迪娅的生日。但就在黎明时分，蒙特里久尼遭到了由凯撒·波吉亚率领的波吉亚家族军队的围攻，马里奥很快和艾吉奥碰头，说自己会保护好苹果，让他负责用大炮阻挡入侵者，他自己率队突击。

然而，马里奥在战斗中身负重伤并被打败，他徒劳地试图逃回城里，却奄奄一息地瘫倒在了城门口。而凯撒和他的三名大将紧紧跟上来，分别是奥克塔维安·德·瓦卢瓦、胡安·波吉亚以及米凯莱托·科雷拉。当他试图重新站起来的时候，凯撒走到他身边并高呼吸引艾吉奥。

凯撒拿着得到的苹果，用手枪射中了马里奥的头，杀了这名刺客，将这称为他家族对艾吉奥家族的一次“邀请”。 凯撒接着斩下了马里奥的头颅，扎在长矛上，进一步刺激逃跑中的艾吉奥。

马里奥死后，小镇被摧毁，而奥迪托雷别墅也被劫掠并被荒弃，而此刻组织不得不转移到罗马，有尼克罗·马基雅维利领导。

马里奥穿着文艺复兴时期意大利贵族们的华丽服饰，长长的黑头发被打理成光亮整洁的运动发型。他的左眼有一道伤疤，这次伤也导致了他左眼失明。他同时也是一个充满激情的人，毫不掩饰他对战斗和饮酒的狂热。但他面对一些人的无知和愚蠢也会保持冷静。

马里奥很在意他的家庭，并为自己的刺客血统感到深深的自豪。从他给乔万尼的信和两人截然不同的战斗风格可以看出，他经常半开玩笑地批评他的弟弟，就像他的侄儿费代里科对艾吉奥做的那样。他和侄子也保持着很好的关系，他经常向对待自己的孩子一样训练艾吉奥。

马里奥左肩的皮革肩垫上绣有刺客徽记，还有一件奥迪托雷家族披风缝在他的披肩上。

近距离观察可以发现，马里奥喜欢在对话时把手搭在对方肩上，这大概是传递一种亲近的信号。

马里奥是一名熟练的战士以及战术家，他从小被训练成为一名刺客并将大多数时间都放在保卫家园不受佛罗伦萨军队的侵扰中。他还擅长飞刀和剑术，在战斗中打败了卢西亚诺·佩扎蒂， 并在后来也教导了侄子战斗的艺术。而也正是因为他的刺客训练，让他可以在六十多岁的高龄中还能奔跑自如，并能做出信仰之跃。

Mario这个名字来源于拉丁语的Marius，意思是“火星之神”，或者mas、maris，意思是“男性”。

在《兄弟会》开始时马里奥的头发呈灰色。这与他在《刺客信条2》中最后出场的形象有较大不同。